一、产品概述
重组人白血病抑制因子(Recombinant Human Leukemia Inhibitory Factor, rHuLIF)
产品货号:FD0047。表达系统:中国仓鼠卵巢细胞(CHO 真核表达系统)。分子特征:成熟肽片段(Ser23–Phe202),天然折叠,Tag-free(无标签)。
产品定位:高活性(ED50≤0.1 ng/mL)、无标签重组人 LIF 蛋白质,是胚胎干细胞(ESC)与诱导多能干细胞(iPSC)未分化多能性维持、神经分化调控及无血清干细胞培养基配制的核心关键添加剂。
二、靶点背景:LIF 是什么
2.1 分子身份与家族归属
白血病抑制因子(LIF)属于 IL-6 家族糖基化细胞因子。人源成熟 LIF 蛋白由 Ser23 至 Phe202 共 180 个氨基酸残基组成,理论分子量约为 19.7 kDa(UniProt 登录号:P15018)。因最初被发现能诱导髓系白血病 M1 细胞停止增殖并定向分化为成熟巨噬样细胞而得名。
2.2 受体与信号通路
LIF 在靶细胞表面发挥作用依赖于高亲和力受体复合物的形成:
受体组装:LIF 首先以低亲和力结合配体结合亚基 LIFRβ,随后招募信号转导亚基 gp130,形成高亲和力的 LIFRβ/gp130 异二聚体复合物。
信号级联:受体二聚化激活胞内受体相关酪氨酸激酶(JAK),引发以下核心通路:
JAK-STAT3 通路(最关键):促使 STAT3 磷酸化并入核,转录激活 Oct4、Sox2、Nanog 等多能性转录因子。
MAPK/ERK 与 PI3K-AKT 通路:协同调控细胞存活、增殖与自我更新。
2.3 核心生物学功能
干细胞多能性维持:抑制小鼠胚胎干细胞(mESC)与诱导多能干细胞(m-iPSC)自发分化,维持其自我更新与多能性状态。
细胞分化双向调控:不仅能抑制髓系白血病细胞增殖,还能诱导胆碱能神经元、星形胶质细胞及脂肪细胞的定向分化。
胚胎植入与生理组织修复:在囊胚植入子宫内膜、滋养层发育、骨重塑及心肌/神经组织损伤修复中发挥保护作用。
2.4 研究价值
LIF 是干细胞与再生医学、发育生物学、类器官构建、神经科学研究及化学成分限定培养基(Chemically Defined Media)开发中不可替代的基础工具因子。
三、产品设计与核心优势
真核 CHO 表达系统:相比于大肠杆菌表达产品,CHO 表达的 LIF 具备天然的糖基化模式,水溶性更好,在培养体系中半衰期更长,生物活性大幅提高。
Tag-free 无标签设计:去除 N 端信号肽,保留天然成熟肽序列(Ser23–Phe202)。无需担心标签影响受体结合结合位点或引发非特异性免疫应答。
高生物活性,低使用成本:ED50≤0.1 ng/mL,仅需极低添加量(通常 5–10 ng/mL)即可达到最大生物学效应,显著降低干细胞长期维持的实验成本。
稳定冻干与超净质量:无菌冻干于 PBS(含甘露醇及微量非离子表面活性剂)保护基质中,内毒素严格控制在≤10 EU/mg,确保无细胞毒性。
四、规格与订购表
规格与订购
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货号 |
规格 |
表达系统 |
纯度 |
建议用途 |
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FD0047 10 |
10 µg |
CHO |
≥95% |
条件摸索 / 小量试用 |
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FD0047 50 |
50 µg |
CHO |
≥95% |
常规干细胞日常培养 |
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FD0047 1000 |
1 mg |
CHO |
≥95% |
规模化培养 / 培养基开发 |
订购须知:
以上价格为标准人民币含税价,具体折扣及实时库存请以官网下单页面为准。
如需 10 mg 以上的工业级 / 培养基开发大包装定制,请联系客服获取定制报价。
五、技术参数总表
技术参数总表
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参数项 |
技术指标与规格细节 |
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英文名称 |
Recombinant Human Leukemia Inhibitory Factor (rHuLIF) |
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中文名称 |
重组人白血病抑制因子 |
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物种来源 |
人源 (Human) |
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表达宿主 |
CHO 细胞 |
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氨基酸片段 |
Ser23–Phe202(成熟肽,UniProt: P15018) |
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融合标签 |
无标签 (Tag-free) |
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表观分子量 |
还原 SDS-PAGE 下约为 19.7–25 kDa(因糖基化修饰呈现微小条带偏移) |
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蛋白纯度 |
≥95%(经 SDS-PAGE 及 SEC-HPLC 纯度标定) |
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内毒素水平 |
≤10 EU/mg(LAL 凝胶法检测) |
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冻干缓冲基质 |
无菌 PBS, 5% 甘露醇, 0.01% Tween-20, pH 7.4 |
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生物活性 |
人 TF-1 细胞增殖法测定,ED50≤0.1 ng/mL(≥1.0×10⁷ U/mg) |
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复溶建议 |
使用无菌去离子水复溶至 0.1–1.0 mg/mL 母液 |
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产品形态 |
白色疏松冻干粉末 |
六、质量控制(QC)
每一批次重组人 LIF(FD0047)均经过严格的放行质检检测,确保批间高度一致:
纯度控制:SDS-PAGE 还原与非还原凝胶电泳显示单一主峰条带,纯度大于 95%。
内毒素检测:采用鲎试剂(LAL)法进行检测,内毒素严格低于 10 EU/mg。
生物活性测定:以人红白血病细胞系(TF-1)的剂量依赖性增殖效应为检定模型,按批次标定 ED50 值(严格控制在≤0.1 ng/mL)。
随货 CoA:每批产品均随货附带分析证书(Certificate of Analysis),包含批号、实测纯度、实测内毒素及活质数据。
七、使用指南
7.1 复溶 SOP(Standard Operating Procedure)
瞬时离心:开封前请将冻干粉管于 10,000 rpm 离心 30 秒,使粘附在管壁或管盖上的冻干粉末沉降至管底。
复溶母液配置:
加入无菌去离子水或无菌 PBS(建议添加 0.1% 载体蛋白如 BSA 或 HSA 以防止容器壁吸附),重构至母液浓度 0.1–0.5 mg/mL(如 50 µg 加入 100–500 µL 缓冲液)。
轻轻颠倒混匀或静置 10 分钟使其完全溶解,切勿剧烈漩涡振荡(Vortex)以防蛋白变性。
分装保存:复溶后的母液按单次实验用量进行小体积分装,立即置于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 冻存。
7.2 推荐使用场景与终浓度
推荐使用场景与终浓度
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实验体系 |
推荐终浓度范围 |
使用建议 / 备注 |
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mESC / m-iPSC 维持培养 |
5–10 ng/mL(相当于 500–1000 U/mL) |
配制完成的完全培养基建议在 4 ℃ 避光保存并在 2 周内用完 |
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TF-1 细胞生物活性 Assays |
0.01–1.0 ng/mL |
用于测量剂量-反应曲线 |
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星形胶质细胞 / 神经元诱导分化 |
10–20 ng/mL |
根据具体分化 Protocol 进行梯度摸索 |
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髓系白血病 M1 细胞分化研究 |
10–50 ng/mL |
诱导细胞停止增殖并发生粘附分化 |
7.3 保存与稳定性条件
冻干粉末状态:在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 干燥避光条件下,可稳定保存 12 个月。
复溶母液状态:
短期保存:2–8 ℃ 无菌条件下可保存 1 周。
长期保存:分装后置于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 可保存 3–6 个月。严禁反复冻融!
7.4 注意事项
本产品仅限科研用途(Research Use Only, RUO),不得用于临床诊断或治疗。
配制培养基时建议现用现加,避免含细胞因子培养基高温水浴过久。
八、核心应用场景
胚胎干细胞(ESC)与 iPSC 培养:作为小鼠 ESC/iPSC 培养体系的核心因子,激活 STAT3 通路,阻断自发分化,维持干细胞多能性基因(Oct4、Sox2、Nanog)的高表达。
无血清与化学成分限定培养基(CDM)开发:Tag-free 且 CHO 表达的纯净特性,是制备高质量干细胞培养基的理想关键组分。
神经科学研究:诱导星形胶质细胞分化,促进胆碱能神经元成熟,研究神经前体细胞(NPCs)的分化命运决定。
白血病与造血系统研究:构建 M1 等髓系白血病细胞分化抑制/诱导模型,研究造血干细胞微环境。
下游信号通路验证:作为标准的配体工具,验证 LIFRβ/gp130 复合物阻断剂、JAK 抑制剂及 STAT3 磷酸化水平检测。
九、常见问题解答(FAQ)
Q1:人源 LIF(FD0047)能否直接用于小鼠 ESC/iPSC 的培养?
答:完全可以。人源 LIF 与小鼠 LIF 在结构和功能上具有高度交叉反应性。人源 LIF 可以高效结合小鼠细胞表面的 mLIFRβ/mgp130 受体复合物并激活下游 STAT3 通路。事实上,在干细胞科研中,高活性的重组人 LIF 被广泛用于小鼠 ESC/iPSC 的未分化维持培养。
Q2:Tag-free(无标签)产品在 Western Blot 或 ELISA 中如何检测?
答:由于无标签产品不含 His 或 GST 等外源标签,无法使用抗 His/GST 标签抗体进行检测。建议使用特异性识别人 LIF 分子的抗 LIF 多克隆抗体或单克隆抗体(Western Blot 推荐稀释浓度参考抗体说明书)进行显色或定量检测。
Q3:ED50≤0.1 ng/mL 如何换算成培养基的实际添加剂量?
答:ED50 是指引发半数最大生物效应所需的细胞因子浓度(对应比活性≥1×10⁷ U/mg)。在日常干细胞维持培养中,为了保证所有的 STAT3 信号处于完全激活状态并克服培养过程中的天然降解,推荐实际使用浓度为 ED50 的 50–100 倍(即 5–10 ng/mL,相当于 1000 U/mL)。
Q4:复溶后的 LIF 母液在 4 ℃ 下可以存放多久?
答:若复溶母液中添加了 0.1% BSA/HSA 作为载体蛋白,在 4 ℃ 无菌条件下可保存 7 天左右。为了保证最佳活性,强烈建议初次复溶后立即分装并置于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 冻存,避免反复冻融。
Q5:为什么 CHO 表达的 LIF 活性比大肠杆菌(E. coli)表达的产品更稳定?
答:LIF 天然是一种糖基化蛋白。大肠杆菌表达系统无法进行糖基化修饰且需要复杂的体外折叠复性,容易发生聚集沉淀;而 CHO 真核表达系统能够提供天然的糖基化修饰与正确的二硫键匹配,使蛋白在培养基体系中具备更好的水溶性、空间稳定性与体内/体外生物学半衰期。