一、产品概述

产品全称：Recombinant Human TNFRSF12A / Fn14 Extracellular Domain Fc-His Fusion Protein（重组人 TNFRSF12A/Fn14 胞外域-Fc-His 融合蛋白）

大类货号：FX0684

产品类型：可溶性受体–Fc 融合蛋白（Soluble Decoy Receptor，诱饵受体）

核心卖点：

【真核表达】HEK293F 表达体系，具有天然翻译后修饰与准确空间折叠

【二聚增强】C 端 hFc 片段促使受体形成同源二聚体，显著提升对多聚体 TWEAK 的结合亲和力

【高纯低毒】纯度 >92%，内毒素 <0.1 EU/μg，适配细胞水平中和与阻断实验

【双标签设计】C 端融合 hFc 及 His 标签，便于 Protein A/G 抓取、镍柱纯化及二抗检测

【梯度规格】提供 10 μg 至 100 μg 四档规格，满足从小试摸索到规模化筛选的全流程需求

二、靶点背景：TWEAK/Fn14 信号轴

2.1 分子身份

TNFRSF12A（Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily Member 12A），常被称为 Fn14（FGF-inducible 14）或 TWEAKR（TWEAK Receptor），是肿瘤坏死因子受体超家族（TNFRSF）中分子量最小的成员（人全长约 129 个氨基酸，UniProt: Q9NP84）。Fn14 为 I 型跨膜糖蛋白，其胞外域仅包含一个半胱氨酸富集区（Cysteine-Rich Domain, CRD），负责特异性结合其已知唯一配体 TWEAK；胞内段则包含一个短小的 TRAF 结合基序，用于招募 TRAF1/2/3/5 等衔接蛋白。

2.2 配体与结合机制

Fn14 的天然配体为 TWEAK（TNF-like weak inducer of apoptosis, TNFSF12）。膜结合型 TWEAK 可被 Furin 蛋白酶内切剪切为可溶性 TWEAK（sTWEAK）。三聚体形式的 TWEAK 与细胞膜上的 Fn14 结合后引发受体聚拢并激活下游通路。

本产品（FX0684）包含 Fn14 胞外结合域（Glu28–Trp79），重组融合 hFc 后形成可溶性二聚体“诱饵受体”（Decoy Receptor），可高亲和力竞争性捕获环境中的 TWEAK，阻断其与细胞膜受体的结合。

2.3 下游信号与生物学效应

TWEAK/Fn14 信号轴的激活可强效触发经典与非经典 NF-κB 通路，并交叉激活 MAPK/ERK、JNK 以及 PI3K/AKT 信号级联反应，广泛调控：

细胞功能：促进特定细胞增殖、迁移、存活及促炎因子（如 IL-6, IL-8, MCP-1）的释放。

组织重塑与病理特征：参与血管生成、组织损伤修复、骨骼肌萎缩（Muscle Wasting）、缺血再灌注损伤及纤维化进程。

2.4 研究与转化价值

正常生理状态下，Fn14 在大部分健康组织中呈现极低背景表达；然而在实体瘤（如三阴性乳腺癌、胶质母细胞瘤、胰腺癌、非小细胞肺癌）以及慢性炎症/自身免疫性疾病（如类风湿关节炎、狼疮性肾炎）中，Fn14 表达剧烈上调。因此，可溶性 Fn14-Fc 融合蛋白不仅是解析 TWEAK/Fn14 轴信号机制的重要工具，亦是评估阻断剂、抗体及 ADC 药物竞争效能的标准阳性参照物。

三、产品设计与核心优势

胞外域精准截短（Glu28–Trp79）

保留配体结合所需的完整 CRD 结构域（Glu28–Trp79），去除了跨膜区与胞内区，极大提升了重组蛋白的水溶性与稳定性。

hFc 融合引发二聚化

结合 C 端人 IgG1 Fc 段（hFc），通过二硫键促使分子形成同源二聚体。相比单体片段，二聚体可提供双价结合位点，显著增强对三聚体 TWEAK 的亲和力（Avidity Effect）。此外，hFc 允许使用 Protein A/G 快速捕获及抗人 Fc 抗体直接检测。

C 端 His 标签方便纯化与鉴定

融合 6×His 标签，方便后续通过 Ni-NTA 系统进行二次纯化，或在 WB 及 ELISA 体系中使用 Anti-His 抗体进行特异性定量。

HEK293F 真核表达系统

避免了原核大肠杆菌表达系统导致的蛋白错折叠及内毒素高残留问题，天然的糖基化修饰保证了受体与配体结合的生理真实性。

超低内毒素与高纯度

内毒素水平控制在 <0.1 EU/μg，纯度 >92%，严格满足原代细胞培养及敏感细胞系功能阻断实验。

四、规格与订购表

规格与订购表

注：价格与有效期请以官网实时下单页面为准。如需大包装或无 Fc 标签版本、生物素（Biotin）标记版本定制，请联系客户服务部询价。

五、技术参数总表

技术参数总表

六、质量控制（QC）

每批次 FX0684 均经过严格的技术指标质检，确保批次间稳定性：

纯度分析：通过还原与非还原 SDS-PAGE 进行纯度鉴定，主条带纯度均 >92%。

内毒素检测：采用凝胶限量法/动力学显色法鲎试剂（LAL）检测，内毒素指标严格低于 0.1 EU/μg。

身份与标签确认：通过 Western Blot 验证 C 端 His 标签与人 Fc 标签的免疫原活性。

功能活性验证：通过固相 ELISA 测定本产品与重组人 TWEAK（TNFSF12）的结合活性，出具特异性结合曲线及 EC50 值。

批次 CoA 报告：每盒随货附带分析证书（CoA），清楚记录批号、纯度、内毒素测定值与建议储存期限。

七、使用指南

7.1 复溶步骤（Reconstitution）

警告：请勿在未经离心的情况下直接打开瓶盖！冻干粉末在运输过程中可能附着于管壁或管帽。

1. 瞬时离心：开封前，将冻干粉管置于台式微量离心机中，以 ≥3000×g 离心 30 秒，使粉末沉降至管底。

2. 加水复溶：向管中加入适量无菌蒸馏水/超纯水，使最终蛋白浓度达到 0.1–0.5 mg/mL（如：10 μg 规格加入 20–100 μL 无菌水）。

3. 静置与混匀：室温静置 10–15 分钟使其自然溶解，轻柔颠倒或轻微涡旋混匀。严禁剧烈震荡，以防 Fc 融合蛋白因剪切力发生聚集变性。

7.2 典型应用场景与建议起始条件

ELISA 包被/捕获实验：作为包被诱饵，建议包被浓度为 0.5–2.0 μg/mL（PBS，pH 7.4），4 ℃ 过夜包被。检测体系：可使用 HRP 标记的 Anti-Human IgG Fc 抗体或 Anti-His 抗体进行显色信号放大。

细胞水平 TWEAK 中和/阻断实验：建议将 FX0684 与重组 TWEAK 蛋白（如 10–100 ng/mL）在 37 ℃ 下预孵育 30–60 分钟，形成复合物后再加入细胞培养体系中，观察对下游 NF-κB 激活或细胞迁移的阻断效果。

结合动力学分析（SPR / BLI）：利用 Protein A/G 芯片抓取 FX0684（捕获量建议 100–300 RU），而后流路注入不同浓度的 TWEAK 蛋白梯度溶液进行亲和力（KD）测定。

7.3 保存与稳定性

冻干粉状态：在 -20 ℃ 至 -80 ℃ 下干燥避光可稳定保存 12 个月。

复溶后母液：在 4 ℃ 条件下可短期保存 2–7 天（须确保无菌）。若需长期保存，必须用含 0.1% BSA 或 5% 糖类的无菌 PBS 进一步稀释分装，置于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 冻存，可稳定保存 3–6 个月。

禁忌：切勿反复冻融（Avoid repeated freeze-thaw cycles）！

7.4 注意事项（Fc 融合蛋白特有）

Fc 受体/背景干扰排查：在免疫细胞或表达 FcγR 的细胞体系中，hFc 段可能产生非特异性结合。建议设置人 IgG1 Fc 同型对照蛋白（Human IgG1 Fc Isotype Control）以排除 Fc 段本身引发的背景信号。

还原剂禁忌：储存与结合缓冲液中不可混入高浓度还原剂（如 >1 mM DTT 或 >5 mM β-巯基乙醇），否则会破坏 Fc 段间的二硫键及二聚体结构。

使用限制：本产品仅供科研使用（Research Use Only），不得用于人体诊疗或临床治疗。

八、应用场景

TWEAK/Fn14 轴结合与亲和力分析：作为可溶性捕获受体，用于体外定量测量 TWEAK 配体的结合动力学。

细胞功能阻断与信号通路研究：在细胞培养体系中阻断膜上 Fn14 的激活，探究其对 NF-κB 通路、炎症因子分泌、细胞迁移及侵袭的影响。

抗体与小分子药物筛选对照：作为诱饵受体，在阻断性抗体（Anti-TWEAK / Anti-Fn14）活性鉴定中充当竞争阳性对照。

肿瘤与病理机制建模：在肿瘤微环境或肌肉萎缩/炎症模型中，体外添加诱饵受体以模拟生理中和效应。

检测平台建设：作为标准品或包被抗原，用于建立夹心法 ELISA 或 AlphaLISA 高通量检测体系。

九、常见问题（FAQ）

Q1：为什么本产品设计为 Fc 融合形式？相比纯胞外域无标签蛋白有何优势？

答：Fn14 的胞外域较小（仅约 50 个氨基酸），单独表达分子量极小且不稳定。融合 hFc 段具有三大优势：形成二聚体，大幅增强对配体 TWEAK 三聚体的双价结合亲和力；大幅提高蛋白稳定性，提升体外储存及细胞孵育过程中的半衰期；简化检测，可直接使用通用的抗人 IgG Fc 二抗进行显色或检测，无须针对 Fn14 开发二抗。

Q2：实验中如何排除 Fc 段本身的非特异性干扰？

答：hFc 段可能与表达 FcγR 的细胞（如单核/巨噬细胞）发生结合。建议在细胞阻断实验中同时设立同型对照组（Isotype Control），即加入等摩尔浓度的“纯重组 Human IgG1 Fc 蛋白”，以扣除 Fc 段带来的背景效应。

Q3：SDS-PAGE 胶上测得的单体分子量（35–45 kDa）为什么高于理论氨基酸计算值？

答：根据氨基酸序列计算的分子量约为 31–33 kDa，但在 HEK293F 真核表达过程中，Fn14 胞外域及 hFc 发生天然的 N-糖基化修饰，导致 SDS-PAGE 电泳中的表观分子量迁移至 35–45 kDa，这属于正常的真核表达糖基化现象。

Q4：如何使用本产品阻断细胞表面的 TWEAK-Fn14 信号？

答：建议采用“预孵育”策略：将可溶性 TWEAK 配体（或含 TWEAK 的培养上清）与一定浓度梯度的 FX0684 在 37 ℃ 共孵育 30–60 分钟，使 FX0684 充分结合并“中和”TWEAK，而后将复合物混合液加入靶细胞中孵育，检测下游 NF-κB 磷酸化或靶基因表达。

Q5：复溶后若出现微量轻微浑浊，应如何处理？

答：高浓度蛋白复溶时偶见微量可逆聚合物。请先检查是否按要求使用了无菌蒸馏水复溶；若有微量沉淀，可在 4 ℃ 下以 12000×g 离心 5 分钟，取上清液使用（上清液不影响实际生物学活性与浓度）。