1. 产品基本信息
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项目 |
内容 |
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产品全称 |
重组鱼类碱性成纤维细胞生长因子 |
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中文名称 |
重组鱼碱性成纤维细胞生长因子 |
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产品缩写 |
rFish bFGF |
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表达系统 |
大肠杆菌表达系统（E. coli） |
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种属来源 |
斑马鱼（与主干硬骨鱼序列同源性高） |
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理论分子量 |
约17.2 kDa（单体，SDS-PAGE表观一致） |
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产品纯度 |
SDS-PAGE纯度≥95%；SEC-HPLC纯度≥95% |
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内毒素水平 |
<0.1 EU/μg（鲎试剂LAL显色法测定） |
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产品货号 |
FB0135-10（10 μg）/ FB0135-50（50 μg）/ FB0135-1M（1 mg） |
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外观性状 |
白色疏松冻干粉（经无菌过滤后冻干） |
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冻干缓冲系统 |
20 mM PB、150 mM NaCl、pH 7.4，含5%海藻糖保护剂 |
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复溶推荐溶剂 |
无菌超纯水或含0.1% BSA的无菌PBS（pH 7.4） |
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保存条件 |
冻干粉：−20℃至−80℃避光干燥保存；避免反复冻融 |
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保质期限 |
冻干粉未开封：12个月（−20℃）；复溶分装后：1个月（−20℃） |
2. 产品背景与作用
2.1 bFGF概述
碱性成纤维细胞生长因子（bFGF，亦称FGF-2）属于典型的肝素结合型生长因子家族成员。它不仅对来源于中胚层和神经外胚层的细胞（如成纤维细胞、内皮细胞、上皮细胞、神经元细胞）具有显著的促进再生作用，还是维持干细胞与多能干细胞未分化状态的核心成分。
2.2 鱼类bFGF生理功能
在硬骨鱼类生理体系中，bFGF深度参与创伤修复与组织器官再生。斑马鱼拥有强健的断鳍再生、鳞片再生以及损伤完全再生能力，研究证实bFGF是原始芽基（Blastema）形成、组织去创、伤口上皮细胞覆盖以及再生毛细血管形成的关键始动信号分子。
2.3 作用机制与信号通路
rFish bFGF与细胞表面硫酸肝素蛋白多糖（HSPG）结合形成三元复合物，诱导成纤维细胞生长因子受体（FGFR1–FGFR4）发生膜二聚化，引发细胞内酪氨酸激酶自磷酸化：
· Ras-Raf-MEK-ERK1/2通路：向核内传递分裂信号，促进细胞由G0/G1期进入S期，强效刺激成纤维细胞与内皮细胞增殖。
· PI3K-Akt通路：抑制促凋亡因子Bad及Caspase-9，上调Bcl-2家族抗凋亡信号，维持鱼体外细胞在低密度或无血清压力下的存活率。
2.4 鱼源重组蛋白的独特优势
传统细胞生物学多直接采用人源或小鼠源bFGF开展鱼类实验，然而：
· 结构结合差异：结构域结合差异：鱼源bFGF与鱼类FGFR的结合动力学存在偏差；
· 培养温度差异：鱼类细胞体外培养通常在18–28℃条件下进行，人源蛋白最适反应温度为37℃，易在常温/低温体系中发生构象解聚；
· 本品优势：rFish bFGF完整保留硬骨鱼天然结合槽与热稳定性特征，在较低的添加浓度下即可获得比异种重组蛋白更稳定、持久的生物学刺激活性。
3. 质控指标（QC检测）
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质控测试项目 |
检测方法/程序 |
质控标准（放行标准） |
检测结果示例 |
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表观纯度 |
还原性SDS-PAGE（考马斯亮蓝染色） |
目的条带单一，纯度≥95.0% |
约17.2 kDa，单一高纯度条带 |
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分子聚集体 |
分子排阻高效色谱（SEC-HPLC） |
主峰面积≥95.0% |
98.2%（无明显二聚体与聚合物） |
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生物学活性测定 |
斑马鱼成纤维细胞（ZF4）增殖CCK-8法 |
ED50≤1.0 ng/mL（效价>1.0×10⁶ IU/mg） |
0.15–0.65 ng/mL |
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细菌内毒素 |
鲎试剂动态显色法（LAL） |
<0.1 EU/μg（即<1.0 EU/mg） |
符合标准（实测<0.05 EU/μg） |
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残留宿主蛋白与核酸 |
专用双抗夹心ELISA / qPCR |
污染物残留<0.01%；DNA<10 pg/mg |
满足极低残留要求 |
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支原体检测 |
琼脂培养基培养法 / PCR |
无菌生长，无支原体污染 |
合格 |
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蛋白含量与装量 |
BCA法与A280 |
标签标注理论装量±5% |
标称量符合 |
4. 推荐应用方向
本品专供科研实验使用，广泛适用于以下体外及离体生物学场景：
· 鱼类原代与传代细胞系培养：促进鳍条、鳃、吻部等组织原代细胞贴壁与增殖（如ZF4、EPC、CIK、RTG-2细胞系）；提高原代组织块消化后的原代细胞爬出速度，降低传代死亡率。
· 细胞培养鱼肉 / 水产细胞农业（Cellular Aquaculture）：作为肌肉卫星细胞（Muscle Satellite Cells）与成纤维细胞无血清/低血清大规模无异源培养的关键必需因子。
· 体外创伤治疗与细胞迁移分析：构建鱼类划痕实验（Wound Healing Assay）、Transwell迁移模型，研究再生修复驱动机制。
· 硬骨鱼组织器官再生与发育机制研究：离体组织块培育（鳍条再生、鳞片矿化模型）；调控间充质细胞向软骨/骨细胞早期分化及相关基因表达网络分析。
· 水产体外3D培养与类器官模型：参与类器官基质胶构建，支持体外微组织血管样结构出芽与自构建。
合规声明：本品供生命科学基础与科研工业研发实验室使用，严禁直接用于人类或动物活体治疗、临床诊断、食品原料或直接投入水产养殖。
5. 使用操作说明
5.1 冻干粉开盖与复溶指南
· 瞬时离心：冻干粉在长途运输颠簸过程中可能粘附于管壁或管盖。使用前将管子置于微量离心机中，以10,000 rpm瞬时离心20–30秒，使粉末蛋白充分沉集至管底。
· 选择复溶溶剂：长期保存（推荐）：使用无菌无内毒素PBS（pH 7.4）+0.1%药用级BSA（或0.1%重组人血清白蛋白/5%海藻糖）。载体蛋白的存在可大大降低bFGF在塑料管壁上的吸附。
· 短期使用：无长期保存需求：使用无菌超纯水（Milli-Q）或无菌PBS（pH 7.4）。
· 复溶浓度：建议复溶至储备液浓度0.1–0.5 mg/mL（例：向50 μg规格产品中加入100 μL溶剂即可获得0.5 mg/mL储备液）。
· 轻柔溶解：加入溶剂后，轻柔吹吸或缓慢颠倒混匀，随后静置15–20分钟以确保完全水化重折叠。严禁剧烈涡旋（Vortex）振荡，防止蛋白变性聚集产生沉淀。
5.2 推荐工作浓度区间
因不同鱼种细胞对bFGF的敏感度存在差异，建议首次实验根据以下浓度区间进行优化：
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实验体系 |
推荐最终浓度范围 |
典型参考浓度 |
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常规鱼类原代/传代细胞培养（维持与补充） |
2–20 ng/mL |
10 ng/mL |
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低血清/无血清定向刺激实验 |
5–50 ng/mL |
20 ng/mL |
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局部划痕损伤修复与迁移趋化 |
10–100 ng/mL |
25 ng/mL |
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水产3D类器官与微球构建 |
20–100 ng/mL |
50 ng/mL |
5.3 肝素协同增效建议
bFGF属于典型的肝素结合蛋白。在细胞培养体系中，建议配合添加1–5 μg/mL培养级低分子肝素（肝素钠）。肝素可促进bFGF形成功能性稳定构象，有效掩蔽降解位点，使其在培养箱中的半衰期延长数倍，并辅助其高效聚集于FGFR受体复合物上。
5.4 分装与冻融规范
· 复溶后的储备液严禁直接置于−20℃反复冻融（每经历一次冻融，活性衰减15%–30%）。
· 请使用低吸附微量离心管（Low-bind Tube），根据单次实验用量分装（如5–10 μL/管），并在−20℃或−80℃下密封避光冷冻。
6. 存储与稳定性
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状态 |
储存环境 |
推荐保存期限 |
补充说明 |
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未开封冻干粉 |
−20℃至−80℃干燥避光 |
12个月（1年） |
避免受潮，出库后避免长时间常温放置 |
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未开封冻干粉（临时） |
2℃–8℃冰箱避光 |
最后1个月 |
建议收货后立即置于−20℃ |
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复溶后储备液（含0.1% BSA） |
2℃–8℃洁净环境 |
5–7天 |
需严谨无菌操作，用于近期实验连续取用 |
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复溶后小规格分装冻存 |
−20℃或−80℃ |
3–6个月 |
避免无霜冰箱（化霜周期会导致温度波动） |
运输方式：国内发货均采用全程蓝冰或干冰保冷运输，保证收到时冰袋处于微融或结冰状态。
7. 安全提示和废弃物处理
· 实验室生物防护：本品浓度高、具有促进细胞增殖活性。操作时请严格穿戴标准防护实验服、丁腈手套及防护口罩，并在超净工作台或生物安全柜内开启使用，避免吸入气溶胶或溅入眼部及黏膜。
· 意外暴露处理：若不慎溅入眼部或接触皮肤，应立即使用足量清水或生理盐水冲洗15分钟以上；若发生误食或严重吸入引起不适，请立即就医。
· 排放处理规范：残留液、擦拭废纸及接触过本品的枪头均须视作生物学危险物质，需收集并经121℃高温高压灭菌处理，或浸泡于10%次氯酸钠消毒液中30分钟以上，并交由实验室合规危废单位回收处理。
8. 常见问题（FAQ）
· Q1：水产细胞体外培养，为什么必须使用鱼源bFGF，而不能直接用人源或小鼠源bFGF？
答：硬骨鱼与人、鼠在进化上分化较早，鱼类FGFR胞外配体结合区的空间构象、表面排布与人源序列存在差异。使用人源bFGF刺激鱼类细胞时，常表现出受体亲和力低、需增加数倍剂量才见微弱表型的缺陷；此外，人源蛋白最适反应温度为37℃，在硬骨鱼低温培养体系下其构象稳定性与诱导磷酸化效率明显下降。使用rFish bFGF可保证尽可能的同源效应与生理模拟效应。
· Q2：复溶后的蛋白为何迅速失活？如何延长其在培养箱中的作用周期？
答：未添加保护剂的游离bFGF在生理培养条件下半衰期很短（约数小时）。改善方案包括：①复溶溶剂中必须引入0.1%载体蛋白（如BSA或HSA）以阻止塑料耗材表面非特异吸附；②实验体系中额外补充微量肝素（1–5 μg/mL），保护其功能结构免遭血清中微量蛋白酶降解；③细胞实验期间，建议每48小时半量或全量换液，并新鲜补加相应浓度的因子。
· Q3：产品复溶后如果短期内用不完，可以在4℃保存吗？
答：不建议。若复溶后在一周内无法使用完，务必在复溶水化后1小时内按单次用量小规格分装，并投入−20℃或−80℃快速冷冻，随用随解冻。
· Q4：本产品能否用于鱼体活体注射（如斑马鱼体内断尾再生实验）？
答：本品内毒素控制极为严苛（<0.1 EU/μg）、纯度高，可满足鱼体原位显微注射（如斑马鱼幼鱼细胞注射、成鱼腹腔或损伤处微量点样注射）的基础科研要求。但由于活体实验增加复杂性，注射剂量应预先进行初步实验梯度探索；且本产品仅限于体外科研探索，不可作为兽药添加剂或临床药剂。
· Q5：本品能否与其他细胞因子联合复配？
答：可以。在鱼类干细胞及类器官培养中，rFish bFGF可与重组鱼源表皮生长因子（rFish EGF）、重组鱼源血管内皮生长因子（rFish VEGF）、重组胰岛素样生长因子（rFish IGF-1）协同作用，构建完整的促生长与微环境血管生成支撑网络。
