一、产品概述
重组人表皮生长因子（Recombinant Human EGF）是一种强效的促有丝分裂多肽细胞因子。本产品采用中国仓鼠卵巢细胞（CHO）真核系统表达，对应人源EGF前体蛋白（UniProt: P01133）的成熟活性肽段（Asn971–Arg1023），采用无融合标签（Tag-Free）设计，其天然立体构象与人内源性EGF高度一致。
二、技术规格与理化参数
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项目 |
参数指标 |
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英文全称 |
Recombinant Human Epidermal Growth Factor (rh-EGF) |
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产品货号 |
FD0011（10 μg规格对应货号：FD00110） |
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来源种属 |
Human（人源） |
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表达宿主 |
CHO细胞（真核表达系统） |
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氨基酸序列 |
Asn971–Arg1023（成熟区53个氨基酸，序列：NSDSECPLSH...WWELR） |
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UniProt编号 |
P01133 |
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表观分子量 |
理论计算值约6.2 kDa（还原性SDS-PAGE呈现单一条带） |
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产品纯度 |
≥95%（经SDS-PAGE考马斯亮蓝染色及SEC-HPLC分析） |
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内毒素水平 |
≤10 EU/mg（鲎试剂LAL显色法） |
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生物学活性 |
通过小鼠Balb/c 3T3细胞增殖实验测定，ED50≤0.5 ng/mL（对应比活性≥2.0×10⁶ IU/mg；每批次实测值详见随货CoA） |
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物理性状 |
无菌白色疏松冻干粉 |
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冻干缓冲体系 |
无菌1×PBS（pH 7.4），含5%甘露醇（Mannitol）及0.01% Tween-20 |
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标准规格 |
10 μg/管（支持mg至g级工业原料定制） |
三、分子机理与信号通路
EGF与靶细胞膜表面的表皮生长因子受体（EGFR / ErbB1 / HER1，属受体型酪氨酸激酶RTK家族）特异性结合后，触发受体同源或异源二聚化，并激活胞内酪氨酸激酶区自磷酸化，向下游传导多条关键生命信号级联。
四、推荐科研应用与参考工作浓度
注：以下工作浓度均为体外科研参考值。因不同靶细胞膜表面EGFR受体密度存在显著差异，建议在正式实验前进行梯度剂量预实验（推荐梯度：0.1, 1, 5, 10, 20, 50, 100 ng/mL）。
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应用场景 |
推荐工作浓度 |
操作建议与技术说明 |
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常规上皮/成纤维细胞培养（HaCaT, NIH-3T3, HEK293等） |
5–20 ng/mL |
添加至低血清或无血清培养基中，支持细胞贴壁扩增，维持细胞对数生长期。 |
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成体干细胞与类器官培养（Organoids & Stem Cells） |
20–50 ng/mL |
用于肠道上皮、气道、乳腺类器官及神经干细胞的无血清分化/扩增培养，维持干细胞微环境稳态。 |
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EGFR信号通路即时激活研究（WB磷酸化检测/IP） |
50–100 ng/mL（刺激5–15 min） |
实验前细胞需无血清饥饿培养（Starvation）12–16 h，脉冲刺激后快速冰浴裂解，检测p-EGFR、p-ERK、p-Akt水平。 |
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细胞划痕与迁移实验（Wound Healing Assay） |
10–50 ng/mL |
用于模拟创面愈合微环境，研究上皮组织修复机制；建议配合低浓度血清以排除细胞增殖对迁移距离的干扰。 |
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体外配方筛选与活性评测（原料研发/功效验证） |
按实验设计摸索 |
作为阳性对照或分子标品，用于促细胞代谢模型、胶原合成刺激模型及体外诊断研发。 |
五、使用操作指南（SOP：复溶与分装）
1. 开盖前离心
冻干粉在长途运输颠簸中可能分散吸附于管盖或内壁。开封前，请务必使用微量离心机以10,000–12,000 rpm离心30–60秒，使全部干粉沉降至管底。
2. 母液复溶
· 推荐复溶溶剂：无菌超纯水（细胞培养级、无内毒素）或灭菌1×PBS（pH 7.2–7.4）。
· 推荐复溶浓度：0.1 mg/mL（即100 μg/mL）。对于本规格（10 μg）：向管内加入100 μL上述无菌水或缓冲液。
· 溶解手法：盖紧管盖后轻轻上下颠倒或轻微吹吸混匀，严禁使用涡旋振荡器（Vortex）剧烈震荡，剧烈的液体剪切力会破坏多肽空间构象导致失活。室温静置10–15分钟使其完全复溶。
3. 分装与稀释
· 如需配制极低工作浓度（<10 μg/mL）长期备用，为避免低浓度蛋白非特异性吸附至塑料离心管壁，稀释液中需含有载体蛋白（如0.1%无菌BSA、5%甘露醇或10% FBS）。
· 依据单次实验用量分装（建议每管5–20 μL），立即置于−20℃或更低温度避光冻存。
六、储存条件与稳定性
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包装状态 |
储存温度 |
有效期 |
注意事项 |
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未开封冻干粉 |
−20℃至−80℃ |
24个月 |
干燥避光密闭保存；从冰箱取出后建议在室温回温5分钟再开封。 |
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未开封冻干粉 |
2℃–8℃ |
3个月 |
短期周转保存。 |
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复溶后母液（无菌） |
2℃–8℃ |
5–7天 |
超净台无菌取用，避免微生物污染。 |
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复溶分装冻存液 |
−20℃至−80℃ |
3–6个月 |
严禁反复冻融（Freeze-Thaw Cycles），解冻后应于当日用完。 |
物流运输标准：采用蓝冰（冰袋）冷链保温包装运输；在短期物流常温下干粉构象保持稳定，收到后请根据实验周期及时转移至相应温区。
七、质控标准与生产追溯
苏州丰度蛋白生物技术有限公司建立了完整的基因工程到蛋白纯化质量追溯体系：
· 纯度分析：经非还原及还原SDS-PAGE电泳，在约6.2 kDa处呈现均一清晰主带；分析型SEC-HPLC检测纯度≥95%，无非特异性高分子聚合物。
· 内毒素控制：在万级洁净环境中通过超滤除内毒素工艺处理，内毒素指标严控于≤10 EU/mg，避免在细胞实验中激发非特异性免疫应答。
· 活性标定：建立基于小鼠Balb/c 3T3细胞的剂量依赖性增殖模型（CCK-8显色法），拟合严谨的4参数Logit曲线测定ED50，严格与参考标准品比对。
