一、产品概述
重组人血小板衍生生长因子 AA 同源二聚体(Recombinant Human Platelet-Derived Growth Factor-AA, rHuPDGF-AA)
产品货号:FD0053
表达系统:中国仓鼠卵巢细胞(CHO 真核表达系统)
分子特征:成熟二聚体(Ser87–Thr211),天然折叠,二硫键交联同源二聚体,Tag-free(无标签)
产品定位:高活性(基于 NIH/3T3 增殖法,ED50≤5.0 ng/mL)的 PDGFR-α 同源受体偏好型配体。广泛适用于成纤维细胞与间充质细胞的增殖与趋化迁移、创伤愈合机制研究、器官纤维化模型及 PDGFR 信号转导通路探究。
首屏卖点标签
天然二硫键同源二聚体:CHO 真核表达系统确保间链二硫键正确配对,高度模拟天然分泌型 PDGF-AA。
PDGFR-α 偏好型活化剂:特异性结合激活 PDGFR-αα 二聚体受体,是研究 PDGFR-α 单一通路效应的核心工具。
Tag-free 成熟肽:去除信号肽及外源纯化标签,消除标签引发的空间位阻或受体结合干扰。
严格检定高活性:基于 NIH/3T3 成纤维细胞增殖 Assay,ED50≤5.0 ng/mL(比活性≥2.0×10⁵ U/mg)。
极高纯度与低内毒素:SDS-PAGE 纯度≥95%,内毒素≤10 EU/mg。
PDGF 家族矩阵支持:与 PDGF-CC(FX0691)、PDGF-BB 等形成完整产品矩阵,便于受体选择性研究。
二、靶点背景:PDGF-AA 是什么
2.1 分子身份与二聚体结构
血小板衍生生长因子(PDGF)家族是一类核心的间充质细胞促分裂原。成熟的 PDGF-AA 由两条 PDGF-A 链(Ser87–Thr211,UniProt: P04085)通过链间二硫键交联形成同源二聚体(Homodimer)。
分子量:还原电泳下单体约 14.0 kDa;非还原电泳下活性的同源二聚体约为 28.0 kDa。
半胱氨酸结(Cystine Knot):PDGF 家族包含高度保守的半胱氨酸结结构域,二聚体构象是其结合细胞表面受体并引发生物学活性的必需形式。
2.2 受体特异性与信号通路
PDGF 家族配体与受体酪氨酸激酶(PDGFR-α 和 PDGFR-β)的结合具有高度选择性:
受体结合选择性:PDGF-AA 主要结合并激活 PDGFR-αα 同源二聚体受体。对包含 PDGFR-β 的受体二聚体亲和力极低。
下游信号级联:PDGFR-α 发生自磷酸化后,招募下游适配蛋白,激活以下核心通路:
PI3K-AKT 通路:促进细胞存活,抑制细胞凋亡。
RAS-MAPK / ERK 通路:驱动成纤维细胞与平滑肌细胞的分裂增殖。
PLCγ / PKC 通路:调控细胞重构、骨架重排与趋化迁移。
2.3 生物学功能与研究价值
间充质细胞调控:强效刺激成纤维细胞、血管平滑肌细胞、周细胞及神经胶质细胞的增殖与定向迁移。
创伤愈合与组织重塑:在胚胎发育、肉芽组织形成及血管周细胞募集过程中发挥关键作用。
病理与纤维化:PDGFR-α 信号失调与肺纤维化、肝纤维化、肾脏纤维化及肿瘤基质重塑(Stroma Remodeling)密切相关。
三、产品设计与核心优势
真核 CHO 表达,二硫键正确配对:原核表达系统产生的 PDGF-AA 极易形成无活性的包涵体,且体外复性难以形成正确的链间二硫键;CHO 系统表达的产品为天然折叠的高活性同源二聚体。
Tag-free 活性构象:保留天然 Ser87–Thr211 成熟区段,无 His/GST 标签,完全暴露配体-受体结合界面。
精准的受体选择性研究工具:对比 PDGF-BB(同时激活α 和β 受体),PDGF-AA 是单独研究 PDGFR-α 通路的最佳选择。
低内毒素与高批间稳定性:内毒素低于 10 EU/mg,通过严格的 NIH/3T3 细胞增殖活性质检,确保实验数据的准确可复现。
四、规格与订购表
4.1 FD0053 订购信息
表1 FD0053 订购信息
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货号 |
规格 |
表达系统 |
纯度 |
建议用途 |
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FD0053 |
10 µg |
CHO |
≥95% |
条件摸索 / 小量实验 |
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FD0053 |
50 µg |
CHO |
≥95% |
常规细胞增殖与迁移实验 |
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FD0053 |
1000 µg |
CHO |
≥95% |
规模化培养 / 培养基开发 |
订购提示:若需采购 10 mg 以上规格或寻求无血清培养基组分定制,请联系销售团队。
4.2 PDGF 家族成员受体偏好性与选型对照
表2 PDGF 家族成员受体偏好性与选型对照
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家族成员 |
代表货号 |
配体构象 |
受体结合特异性 |
核心应用领域 |
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PDGF-AA |
FD0053 |
同源二聚体 |
PDGFR-αα |
成纤维细胞增殖、PDGFR-α 偏好信号、创伤愈合 |
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PDGF-BB |
通用工具 |
同源二聚体 |
PDGFR-αα、αβ、ββ |
血管周细胞募集、平滑肌增殖、组织工程 |
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PDGF-CC |
FX0691 |
同源二聚体 |
PDGFR-αα、αβ |
极化促纤维化、脑血管通透性、肿瘤间质研究 |
五、技术参数总表
表3 技术参数总表
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参数项 |
技术指标与规格细节 |
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英文名称 |
Recombinant Human Platelet-Derived Growth Factor-AA (rHuPDGF-AA) |
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中文名称 |
重组人血小板衍生生长因子 AA |
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物种来源 |
人源 (Human) |
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表达宿主 |
CHO 细胞 |
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氨基酸片段 |
Ser87–Thr211(成熟 GFD 域,UniProt: P04085) |
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融合标签 |
无标签 (Tag-free) |
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表观分子量 |
还原 SDS-PAGE:约 14.0 kDa(单体);非还原 SDS-PAGE:约 28.0 kDa(二聚体) |
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蛋白纯度 |
≥95%(经 SDS-PAGE 及 SEC-HPLC 纯度分析) |
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内毒素水平 |
≤10 EU/mg(LAL 凝胶法测定) |
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冻干缓冲基质 |
无菌 PBS, 5% 甘露醇, 0.01% Tween-20, pH 7.4 |
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生物活性 |
基于 NIH/3T3 细胞增殖 Assay,ED50≤5.0 ng/mL(≥2.0×10⁵ U/mg) |
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复溶建议 |
使用无菌去离子水复溶至 0.1–0.5 mg/mL 母液 |
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产品形态 |
白色疏松冻干粉末 |
六、质量控制(QC)
双重 SDS-PAGE 纯度验证:在还原(Reducing)与非还原(Non-reducing)条件下对比验证,非还原电泳下主要呈现约为 28 kDa 的二聚体条带,纯度≥95%。
内毒素检测:LAL 法检测内毒素水平严格控制在≤10 EU/mg。
NIH/3T3 细胞增殖活性标定:采用剂量依赖性刺激小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)增殖实验,按批次测定 ED50 值(严格控制在≤5.0 ng/mL)。
随货 CoA 证书:包含批号、纯度胶图、内毒素与活性检测结果。
七、使用指南
7.1 复溶 SOP(标准操作规程)
瞬时离心:开封前请将管子于 10,000 rpm 离心 30 秒,使管壁附着的冻干粉末沉降至管底。
母液复溶:加入无菌去离子水或无菌 PBS(推荐加入 0.1% 载体蛋白如 BSA 以减少管壁吸附),复溶至 0.1–0.5 mg/mL 浓度。
轻轻颠倒混匀,室温静置 10–15 分钟使其完全溶解。请勿剧烈漩涡振荡(Vortex),避免破坏二硫键二聚体结构。
分装保存:复溶母液按单次实验用量分装后,置于 -20°C 或 -80°C 冻存。
7.2 推荐使用场景与浓度
表4 推荐使用场景与浓度
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实验体系 |
推荐终浓度范围 |
建议使用备注 |
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NIH/3T3 等成纤维细胞增殖 |
5 – 50 ng/mL |
低血清(如 0.5% FBS)培养基条件下添加 |
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划痕实验 / Transwell 细胞迁移 |
10 – 50 ng/mL |
用于观察成纤维细胞的趋化性迁移 |
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PDGFR-α 信号通路激活 (WB) |
10 – 100 ng/mL |
无血清饥饿后,刺激 5–15 分钟检测 p-PDGFR-α |
7.3 保存与稳定性
冻干粉末:在 -20°C 或 -80°C 干燥避光条件下,可稳定保存 12 个月。
复溶母液:短期保存:2–8°C 无菌条件下(含 0.1% BSA)可保存 7 天。
长期保存:分装后置于 -20°C 或 -80°C 可保存 3–6 个月。避免反复冻融!
7.4 注意事项
本产品仅限科研用途(RUO)。
请勿在复溶或保存缓冲液中添加还原剂(如 DTT、β-巯基乙醇),否则会导致二硫键断裂形成无活性的单体。
八、核心应用场景
成纤维细胞与间充质干细胞培养:作为强效促分裂原,用于刺激原代成纤维细胞、平滑肌细胞及 MSCs 的体外扩增与活化。
创伤愈合与组织修复研究:在体外划痕实验(Scratch Assay)与 Transwell 迁移实验中,评估细胞趋化与组织修复能力。
PDGFR-α 信号通路研究:作为特异性配体,研究 p-PDGFR-α、p-AKT、p-ERK 信号级联激活,筛选小分子 RTK 激酶抑制剂。
器官纤维化病理模型:探索 PDGF-AA 在特发性肺纤维化(IPF)、肝纤维化及肾脏病变中的成纤维细胞活化机制。
无血清/低血清培养基组件:作为替代血清生长因子的关键组分,用于配制化学成分限定培养基。
九、常见问题解答(FAQ)
Q1:PDGF-AA 与 PDGF-BB、PDGF-CC 有何受体结合差异?如何选型?
PDGF-AA(FD0053):仅结合并激活 PDGFR-αα 受体。适合专门针对 PDGFR-α 通路的研究。
PDGF-BB:可结合激活 PDGFR-αα、αβ 及 ββ 三种受体,是广谱性生长因子。
PDGF-CC(FX0691):激活 PDGFR-αα 及 αβ,需要蛋白酶切割激活。若研究集中于成纤维细胞活化与特异性 PDGFR-α 信号,首选 PDGF-AA(FD0053)。
Q2:为什么非还原 SDS-PAGE 下显示的条带比还原电泳大一倍?
答:这是由于 PDGF-AA 依靠链间二硫键形成同源二聚体。非还原电泳保留了二硫键,因此显示的是约 28 kDa 的活性二聚体;而在还原电泳中(含有 DTT 或 β-巯基乙醇),二硫键被还原断裂,呈现约 14 kDa 的单体条带。这恰恰证明了产品具备正确的二聚体构象。
Q3:Tag-free(无标签)PDGF-AA 如何在 Western Blot 中检测?
答:检测样本中的 PDGF-AA 时,需使用针对人 PDGF-A 链的高特异性抗 PDGF-A 多克隆或单克隆抗体(推荐检测非还原条件下的二聚体或还原条件下的单体)。
Q4:复溶后可以用于 PDGFR-β 相关实验吗?
答:不推荐。PDGF-AA 对 PDGFR-β 的亲和力极低,无法触发独立的 PDGFR-ββ 自磷酸化。若需探究 PDGFR-β 介导的生理效应,请选择 PDGF-BB 生长因子。