一、产品概述

（一）产品全称与定位

重组人肝细胞生长因子（Recombinant Human Hepatocyte Growth Factor, rhHGF），又称分散因子（Scatter Factor, SF），是一类旁分泌间质生长因子，兼具强效促有丝分裂、促细胞迁移与形态发生功能。

本产品采用中国仓鼠卵巢细胞（CHO 表达系统）重组表达，完全无标签（Tag free）。天然人源成熟 HGF 为异二聚体，由 α 链（约 26 kDa）与 β 链（约 26 kDa）通过跨链二硫键共价连接，总表观分子量约 53.7 kDa。CHO 哺乳动物表达体系可完成 HGF α/β 双链的精准折叠加工、蛋白酶切割切除及复杂 N-糖基化修饰，使其高级结构与人体内源活性 HGF 完全对齐。

rhHGF 特异性结合并激活膜受体酪氨酸激酶 c-Met，在原代肝细胞培养、肝脏切除与急慢性肝损伤再生、上皮组织损伤修复、内皮细胞管腔形成（血管生成）以及肿瘤 c-Met 通路异常激活与转移机制研究中发挥核心作用。

（三）规格与货号对照表

二、HGF 生物学背景与功能

（一）发现历程与双重命名

HGF 的发现源于生物医学领域两个独立方向的碰撞：一是 Hepatocyte Growth Factor（肝细胞生长因子），最初从大鼠及人血小板、血清中分离纯化，因其能强烈诱导体外培养的成熟原代肝细胞进行 DNA 合成与有丝分裂而得名；二是 Scatter Factor（分散因子，SF），由肿瘤生物学家独立发现，因其能使体外紧密成团排列的上皮细胞彼此解离、散开并增强其运动迁移能力而得名。

后续分子克隆与序列分析确证，Scatter Factor 与 HGF 系同一基因编码的同一蛋白质，这一发现奠定了 HGF 作为连接细胞增殖、细胞分散（迁移）与上皮-间质转化（EMT）的多功能生长因子的地位。

（二）分子结构特点（异二聚体结构）

HGF 属于纤溶酶原（Plasminogen）相关基因超家族，分子结构独特且高度复杂：

1. 前体与切割：最初合成时为含 728 个氨基酸的无活性单链前体（pro-HGF），在胞外由丝氨酸蛋白酶（如 HGF 激活物 HGFA、因子 XIIa 或尿激酶 uPA）于 Arg494–Val495 位点发生限制性内切。

2. α 链（Gln32–Arg494，约 26 kDa）：包含 1 个 N 端发卡结构域（N-domain）和 4 个 Kringle 结构域（K1–K4），是高亲和力结合 c-Met 受体及肝素（Heparin）的关键区域。

3. β 链（Val495–Ser728，约 26 kDa）：含类似丝氨酸蛋白酶的催化结构域，虽缺乏蛋白酶活性，但对诱导 c-Met 激酶受体的构象变化及完全激活不可或缺。

4. 成熟结构：α 链与 β 链通过跨链二硫键紧密连接，构成总表观分子量约 53.7 kDa 的活化异二聚体。

（三）受体与信号传导机制

HGF 的已知唯一高亲和力膜受体为 c-Met（由 MET 原癌基因编码），是由 α 亚基与 β 亚基构成的跨膜受体酪氨酸激酶（RTK）。其信号传导机制如下：

1. 受体二聚化与自动磷酸化：HGF 异二聚体与 c-Met 胞外域结合后，诱导 c-Met 发生二聚化，激活胞内激酶域在 Tyr1234/1235 处的自磷酸化。

2. 多功能多肽结合位点：受体 C 末端 Tyr1349/1356 发生磷酸化，形成“多功能多肽结合位点”，招募下游接头蛋白（如 GAB1、GRB2、SHC、SRC 等）。

3. 下游级联效应：Ras-MAPK（ERK1/2）途径驱动肝细胞及上皮细胞进入 S 期，促进 DNA 合成与克隆增殖；PI3K-Akt 途径上调抑凋亡蛋白（如 BCL-xL），抑制肝细胞死亡与组织坏死；STAT3 与 Rac1/Cdc42 途径重塑细胞骨架、下调 E-cadherin 表达，诱导细胞解离与定向迁移。

（四）主要生物学功能

1. 强效促肝再生：HGF 是体内已知的最强促肝细胞有丝分裂原之一。在肝大部切除（PHx）或四氯化碳（CCl4）诱导的急性肝损伤模型中，血浆及肝脏局部 HGF 水平剧增，直接启动余肝细胞的细胞周期运转。

2. 上皮损伤修复与器官保护：在肾脏（急性肾损伤）、肺脏（肺纤维化）、急性胃黏膜损伤及肠道炎症中，HGF 能够保护上皮细胞免于凋亡并加速创面再上皮化。

3. 诱导细胞分散与上皮-间质转化（EMT）：破坏细胞间紧密连接（Scatter 效应），使静止的上皮细胞获得间质样迁移能力，参与胚胎发育及伤口愈合。

4. 促进血管生成：刺激血管内皮细胞增殖、迁移，并在基质胶中形成网状微血管管腔结构。

5. 肿瘤生物学与靶向治疗：c-Met/HGF 轴的高表达或突变与多种实体瘤（如肝癌、非小细胞肺癌、胃癌）的发生、侵袭、耐药及转移密切相关，是目前抗肿瘤靶向药物与单抗研发的热点靶标。

三、产品核心技术参数

四、质量控制与生物活性

为保障原代细胞培养与信号通路分析中的高可重复性，苏州丰度蛋白对重组人 HGF 建立了包含纯度、异二聚体比例、内毒素及下游细胞因子诱导功能的严格放行体系。

（一）双平台纯度与异二聚体确证（SDS-PAGE & SEC-HPLC）

HGF 作为异二聚体蛋白，其 SDS-PAGE 电泳图谱具有独特的判读标准：

1. 还原条件（Reducing SDS-PAGE）：在还原剂（如 DTT 或 β-巯基乙醇）作用下，连接 α 链与 β 链的跨链二硫键被打开，电泳图中呈现清晰的两条带，分别对应 α 链（约 26 kDa）与 β 链（约 26 kDa）。

2. 非还原条件（Non-Reducing SDS-PAGE）：二硫键保持完好，电泳图中呈现单一的高纯度异二聚体条带，表观分子量位于 53.7 kDa 标记处。

3. SEC-HPLC 体积排阻色谱：进一步确证活性异二聚体单体的比例，聚合体及游离单链杂质比例 < 5%，纯度大于 95%。

（二）严格内毒素控制

内毒素是引发原代肝细胞死亡及免疫细胞非特异性应答的主要诱因。本产品采用动态浊度法 LAL 检测，出厂放行标准严控在 ≤10 EU/mg（<0.01 EU/μg），确保满足高敏感度细胞实验要求。

（三）生物学活性测定

测定体系基于 HGF 诱导 Saos-2 人成骨肉瘤细胞分泌白介素-11（IL-11）的活性测定。Saos-2 细胞表面高表达 c-Met，结合 HGF 后通过下游信号通路强效上调 IL-11 的表达与分泌，该分泌量与 HGF 的生物学活性成正比。

定量指标为 ED50 ≤ 2.5 ng/mL；在 0.1 ng/mL 至 50 ng/mL 浓度范围内，rhHGF 诱导 Saos-2 细胞分泌 IL-11 呈现剂量依赖性响应，反映极高的受体结合与激活效价。

五、保存、复溶与操作指南

（一）贮存条件与稳定性

1. 未复溶冻干粉末：在 -20℃ 至 -80℃ 干燥避光条件下，可稳定保存 12 个月。

2. 短期保存：复溶前冻干粉在 4℃ 下保存不宜超过 2 周。

3. 复溶后液体保存：无菌复溶分装后，置于 -20℃ 或 -80℃ 条件下可稳定保存 3–6 个月。严禁多次反复冻融（冻融循环不超过 3 次）。

（二）标准复溶步骤

由于 HGF 为依靠跨链二硫键维持构象的异二聚体蛋白，请严格遵循以下温和复溶规程：

1. 开封前速降离心：开启管盖前，将离心管在 10,000 rpm 下离心 30 秒，使粘附于管盖或管壁上的蛋白粉末沉降至管底。

2. 加入无菌去离子水：使用无菌重蒸水或无菌无内毒素双蒸水，将冻干粉复溶至 0.1–1.0 mg/mL 的高浓度母液。

3. 温和水化混匀：室温静置 5–10 分钟使二聚体粉末充分吸水复溶，轻轻上下颠倒混匀。严禁强烈涡旋（Vortex），防止过大的机械剪切力破坏链间二硫键或导致蛋白变性。

（三）工作液稀释与防管壁吸附

1. 保护性载体蛋白：HGF 在极低浓度下易吸附在聚丙烯（PP）塑料微孔板或离心管壁上。将母液稀释为实验工作液时，强烈建议使用含 0.1% BSA（牛血清蛋白）或 1% HSA（人血清白蛋白）的无菌培养基或 PBS 缓冲液稀释。

2. pH 敏感性注意：HGF 对酸性环境极敏感，低 pH（<6.0）会导致其构象不可逆改变或变性沉淀，稀释缓冲液 pH 应维持在 7.0–7.5。

3. 肝素（Heparin）协同建议：在部分敏感的上皮、内皮细胞培养或血管生成实验中，按 1–10 μg/mL 添加医用级肝素，可通过结合 α 链 Kringle 结构域稳定 HGF 构象并促进 c-Met 二聚化，可根据实验需求协同优化。

六、推荐应用与实验参考

（一）适用实验类型与操作指南

（二）常用细胞因子联用方案参照

七、常见问题 FAQ

Q1：为什么重组人 HGF 在 SDS-PAGE 还原电泳下会显示两条带，而非一条带？

答：这是完全正常的。成熟活性 HGF 由一条 α 链（约 26 kDa）和一条 β 链（约 26 kDa）通过跨链二硫键共价连接而成（总分子量 53.7 kDa）。在还原电泳中，还原剂（如 DTT）打开二硫键，α 链和 β 链解离，故呈现两条约 26 kDa 的条带；在非还原电泳中则保持 53.7 kDa 的单一条带。

Q2：HGF 与 EGF、PDGF 在肝细胞培养及组织修复中的作用有什么本质区别？

答：EGF（表皮生长因子）是广谱的强效有丝分裂原；PDGF（血小板衍生生长因子）主要针对间充质细胞（如星状细胞、成骨细胞）；而 HGF 具有独特的多功能性——它不仅是已知最强效的原代肝细胞促有丝分裂原，还能特异性诱导上皮细胞解离、运动迁移（Scatter 效应）并驱动组织形态发生，在肝脏及上皮损伤修复中具有不可替代的作用。

Q3：Tag free（无标签）形式对 HGF 的活性和异二聚体形成有何优势？

答：HGF 分子结构庞大且高度复杂，α 链与 β 链的正确折叠及二聚化对于受体 c-Met 的结合至关重要。N 端或 C 端的亲和标签（如 His-tag 或 GST-tag）极易引起空间位阻，干扰 α 链中 Kringle 结构域与 c-Met 的结合。Tag free 形式保证了活性口袋的天然暴露与构象完整。

Q4：复溶后若出现微量浑浊或沉淀，该如何正确处理？

答：复溶沉淀通常由离心不充分、剧烈涡旋导致蛋白剪切变性或使用低 pH 稀释液所致。建议：复溶前必须 10,000 rpm 低速离心；复溶时采用无菌水静置水化；若已产生微量沉淀，在 4℃ 下 12,000 rpm 离心 5 分钟，取上清液测定浓度后使用。

Q5：在肿瘤 c-Met 信号通路研究中，本产品能否作为标准配体激动剂使用？

答：完全可以。本产品纯度 ≥95%，且经 Saos-2 细胞下游信号诱导确证，具有极高活性。在探究 c-Met 靶向小分子抑制剂（如 Crizotinib、Tivantinib）或抗体药物的体外阻断实验中，本品可作为标准的天然配体激动剂，用于诱导 c-Met 磷酸化及其下游信号级联响应。