1. 产品基本信息（Product Information）
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项目 |
参数 / 规格 |
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产品名称 |
眼镜蛇毒因子（Cobra Venom Factor, CVF） |
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英文别名 |
CVF, Complement C3 Homolog from Cobra Venom |
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产品货号 |
AP-CVF-010（10 U）/ AP-CVF-050（50 U）/ AP-CVF-100（100 U） |
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表达/提取来源 |
中华眼镜蛇毒（Naja atra）分离纯化 / 宿主表达重组体 |
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分子量 |
约225–230 kDa（非还原SDS-PAGE） |
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外观形态 |
白色或类白色无菌冻干粉末 |
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复溶溶剂 |
无菌超纯水或无菌0.1% BSA/PBS（pH 7.4） |
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纯度与内毒素 |
纯度≥95%（SEC-HPLC），内毒素<0.1 EU/μg |
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适用范围 |
体内外补体耗竭（Decomplementation）模型构建、补体因果验证研究 |
2. 作用机制与产品特点（Mechanism & Features）
2.1 作用机制
眼镜蛇毒因子（CVF）是哺乳动物补体成分C3的结构与功能类似物。
· 形成超稳定转化酶：在Mg²⁺和D因子存在下，CVF与B因子结合并裂解生成CVF-Bb转化酶。
· 抵抗负向调控：天然C3bBb转化酶在37°C下半衰期仅约1.5分钟，且易被H因子和I因子裂解；而CVF-Bb转化酶半衰期长达7小时，且完全抵抗H/I因子的降解。
· 彻底耗竭补体：CVF-Bb在循环系统中持续无差别裂解C3和C5，快速将血清中的C3/C5底物消耗殆尽，使机体呈现暂时的“脱补体状态”（Decomplementation）。
2.2 产品核心优势
· 高比活与高纯度：采用多级柱层析纯化，高效去除毒素杂蛋白与蛋白酶，保证耗竭活性高效稳定。
· 极低内毒素级别：内毒素控制在<0.1 EU/μg，极大降低动物体内过敏性休克与非特异性炎症反应风险。
· 批次稳定性好：每批次均经过严格的in vitro溶血活性（CH50）和in vivo小鼠C3耗竭曲线双重验证。
3. 技术指标与质控标准（Specifications & QC）
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检验项目 |
质控标准（Quality Control） |
检测方法 |
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蛋白纯度 |
≥95% |
SDS-PAGE（还原与非还原）& SEC-HPLC |
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体外质量比活 |
≥1000 U/mg |
致敏绵羊红细胞（SRBC）50%溶血抑制法（CH50） |
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内毒素含量 |
<0.1 EU/μg |
蛋白凝胶鲎试剂法（LAL Assay） |
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宿主DNA/杂质 |
未检出明显毒素杂蛋白峰 |
高效液相色谱（HPLC） |
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无菌测试 |
阴性（无细菌/真菌生长） |
7天平板培养法 |
4. 应用场景与推荐给药剂量（Applications & Dosing）
4.1 推荐应用
· 器官移植研究：同种/异种移植中的超急排斥反应（HAR）与急性血管排斥模型构建。
· 炎症与再灌注损伤：缺血再灌注（心/肝/肾/脑）、急性肺损伤（ALI）及关节炎模型中补体损伤机制评估。
· 自身免疫性疾病：狼疮性肾炎、重症肌无力等模型中的补体因果验证。
4.2 推荐参考剂量（体内/体外）
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实验类型 |
应用对象 |
推荐使用剂量 |
处理/给药方式 |
耗竭维持时间 |
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体外血清实验 |
人/小鼠/大鼠血清 |
8–20 U/mL血清 |
37°C水浴温育45 min |
永久（体外不可逆） |
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小鼠体内模型 |
C57BL/6, BALB/c |
15–25 μg/只（约0.6–1.0 U/g） |
腹腔注射（i.p.），体积≤200 μL |
48–72小时（第5–7天恢复） |
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大鼠体内模型 |
SD, Wistar |
200–400 μg/kg（约60–100 U/kg） |
尾静脉注射（i.v.）或腹腔注射（i.p.） |
48–72小时 |
注：表中μg/kg（或μg/只）为质量参考剂量，U/kg、U/g为按本批试剂COA标定的耗竭活性单位，二者不按固定比活线性换算；不同批次比活存在差异，实际给药以随货COA标定活性为准。
5. 标准复溶与保存指南（Reconstitution & Storage SOP）
5.1 复溶步骤（Reconstitution）
· 开瓶前离心：冻干粉管从−80°C取出后，在室温放置5分钟，开盖前在4°C下10,000×g离心30秒，使附着于管壁的粉末沉降至管底。
· 加入溶剂：加用无菌PBS（pH 7.4）或含0.1%极低内毒素BSA的PBS，将蛋白复溶至0.1–1.0 mg/mL（例如100 U试剂加入1.0 mL溶剂）。
· 静置溶解：置于冰上轻柔颠倒混匀，静置10–15分钟使其完全溶解。【严禁剧烈涡旋震荡（Vortex）】。
5.2 保存条件（Storage）
· 冻干粉状态：−80°C避光保存，有效期24个月；−20°C保存12个月。
· 短期保存：复溶后置于4°C，须在2–3天内用完。
· 长期保存：按单次用量分装于低吸附EP管中，−80°C冻存，可稳定保存6个月。
· 禁忌：严禁反复冻融（冻融次数>2次会导致活性显著下降）。
6. 小鼠体内脱补体模型构建SOP（In Vivo Protocol）
6.1 操作步骤
· 实验前准备：小鼠适应性饲养3天，称重并标记。预先准备低吸附EP管及促凝采血管。
· 采集基线血清（0 h）：通过尾静脉采血30 μL，室温促凝30 min，4°C、3000×g离心10 min，分离基线血清，标记为Baseline。
· CVF给药：取CVF注射液（用0.1% BSA/PBS稀释至合适浓度）。小鼠腹腔缓慢注射（i.p.）20 μg/只（注射体积100–150 μL）。注射速度宜缓慢，防止局部浓度过高。
· 动态采血与效果验证：在给药后6 h、24 h、48 h、72 h分别进行尾静脉小量采血，分离血清。使用CH50溶血法或小鼠C3 ELISA试剂盒检测血清中残留C3浓度。
· 模型成功标准：注射后6–48 h内，血清CH50溶血活性或C3浓度降低至基线（0 h）的<5%。
· 维持给药（可选）：若实验需维持脱补体状态>72 h，可在第3天（72 h）追加腹腔注射首剂量的50%（10 μg/只）。
7. 常见问题排查（Troubleshooting）
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异常现象 |
可能原因 |
排查与改进措施 |
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1. 补体耗竭不彻底（残存C3 > 10%） |
① 试剂多次冻融失活；② 复溶时剧烈涡旋导致蛋白变性；③ 给药剂量不足（小鼠体重大）；④ 动物体内产生抗CVF抗体。 |
① 检查保存条件，使用全新分装冻干粉；② 改为颠倒混匀，冰上静置溶解；③ 重新按1.0 U/g体重计算精确给药；④ 避免在同一只小鼠上反复多次给药。 |
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2. 注射后动物休克或死亡 |
① 注射速度过快导致C3a/C5a瞬间爆发；② 试剂内毒素超标；③ 注射剂量过大。 |
① 减慢注射速度，给药后将动物置于保温垫上；② 使用低内毒素级别CVF（<0.1 EU/μg）；③ 降低首剂剂量至15 μg/只。 |
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3. 补体恢复过快（<48 h回升） |
小鼠肝脏强代偿性合成C3速率过高。 |
在给药后第48 h或72 h按半量补充注射一次CVF。 |
8. 配套试剂与延伸服务（Supporting Products & Services）
为了确保科研人员高效完成“模型构建—耗竭验证—机制分析”的完整科研闭环，苏州丰度蛋白生物技术有限公司提供以下全面配套试剂与定制服务：
8.1 补体检测配套试剂盒
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产品名称 |
货号 |
应用说明 |
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小鼠C3高敏ELISA试剂盒 |
AP-EL-M003 |
精确定量血清中C3残留量（敏感度可达ng/mL级） |
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大鼠C3 ELISA试剂盒 |
AP-EL-R003 |
大鼠脱补体模型效果定量检测 |
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CH50补体溶血活性检测试剂盒 |
AP-CH50-001 |
经典微量板法，快速评估总补体溶血功能 |
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致敏绵羊红细胞（2% SRBC） |
AP-SRBC-02 |
CH50溶血实验专用指示细胞 |
8.2 补体下游炎症因子重组蛋白（高纯度/低内毒素）
· 重组小鼠/人TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10蛋白。
· 重组小鼠/人C3a、C5a重组因子。
· 重组补体因子B（Factor B）、因子D（Factor D）。
8.3 重组蛋白定制与质控服务
· 高难度重组蛋白表达服务：提供HEK293/昆虫细胞系统的复杂多硫键蛋白、膜受体胞外区蛋白定制表达。
· 内毒素清除与质量检测：提供SEC-HPLC纯度分析、LAL内毒素检测及生物学活性标定服务。
