一、导语：CRLF2/TSLPR研究难点与解决方案

胸腺基质淋巴细胞生成素受体（TSLPR，又称CRLF2）是介导上皮源性警报素TSLP（Thymic Stromal Lymphopoietin）级联信号的关键受体亚基。在天然生理状态下，CRLF2本身对TSLP的单独结合亲和力极弱，必须依赖与白细胞介素-7受体α链（IL-7Rα/CD127）形成异二聚体复合物，才能高亲和力捕获TSLP配体并激活下游胞内酶学级联。

这一特殊的异二聚化受体机制为体外机制研究带来了明确的技术挑战：

· 天然单体构象不稳：单独纯化的无标签或短标签CRLF2胞外段在体外缺少天然配对伴侣，易发生非特异性聚集或构象坍塌。

· 结合力检测窗口狭窄：体外筛选中和抗体、小分子抑制剂或可溶性受体诱饵时，单价受体与配体的结合过弱，难以在ELISA或表面等离子共振（SPR）检测中获得高灵敏度的结合动力学信号。

· 免疫细胞对内毒素敏感：在评估2型免疫反应或原代树突状细胞（DC）活化时，重组受体若残留痕量内毒素，极易触发非特异性TLR活化，导致实验假阳性。

针对上述研究难点，本平台现提供高活性现货Human CRLF2重组蛋白（系列货号：FX0672）。该产品采用人源293F悬浮真核表达系统，针对人源CRLF2胞外功能结构域（25–231 aa）进行人源IgG1 Fc（hFc）与His双标签融合构建。hFc的天然二硫键二聚化特性使重组蛋白在溶液中呈现双价空间取向，不仅显著提升了配体识别亲和力，也为配体-受体相互作用解析、靶向抗体筛选及血液肿瘤机制研究提供了理想的即用型工具。

二、靶点背景：TSLP轴与CRLF2的病理生理学特征

1. 分子定义与结构归属

CRLF2（Cytokine Receptor-Like Factor 2）亦称TSLPR，属于I型细胞因子受体超家族成员（UniProt检索号：Q9HC73）。其胞外区包含典型的细胞因子受体同源结构域（CHD）、保守的四个半胱氨酸残基及WSXWS-like模体，是识别TSLP分子的核心区域。

2. 三元复合物形成与信号激活通路

TSLP首先结合CRLF2形成低亲和力中间体，随后募集IL-7Rα形成高亲和力三元信号复合体（KD达皮摩尔级）。CRLF2胞内段组成型结合JAK2，而IL-7Rα结合JAK1；三元复合物形成促使JAK1与JAK2发生空间邻近的交叉反式磷酸化，进而高效激活STAT5（主要为STAT5a/b），并伴随激活PI3K/Akt、Erk1/2 MAPK及Src家族激酶通路。

3. 生理学功能：2型免疫应答中枢

当上皮屏障遭受过敏原、机械损伤或病原微生物刺激时，上皮细胞迅速释放TSLP。TSLP作用于髓系树突状细胞（mDC）表面的CRLF2/IL-7Rα复合体，强烈上调OX40L等共刺激分子表达，诱导初始CD4⁺ T细胞向Th2细胞分化，启动大量IL-4、IL-5、IL-13释放，驱动嗜酸性粒细胞浸润与IgE生成。该轴线是支气管哮喘、特应性皮炎（AD）及嗜酸性食管炎的核心病理开关。

4. 疾病关联：B系急性淋巴细胞白血病（B-ALL）与靶向治疗

在血液系统恶性肿瘤中，CRLF2是公认的关键致癌驱动靶标：

· 染色体易位与基因重排：约5%~15%的儿童及成人B-ALL患者中存在CRLF2基因异常，最常见为IGH-CRLF2易位或位于拟常染色体区的P2RY8-CRLF2基因融合，导致CRLF2在淋巴前体细胞表面异常高表达。

· 点突变与组成型活化：部分病例伴随近膜区Phe232Cys（F232C）突变，该突变通过自发分子间二硫键形成配体非依赖性的组成型二聚体，导致JAK2-STAT5信号持续超激活。

· 临床意义：CRLF2异常高表达与“BCR-ABL-like（Ph-like）ALL”高度重合，伴随高复发率与预后不良，是研发靶向CRLF2抗体偶联药物（ADC）、双特异性抗体、CAR-T及JAK抑制剂（如Ruxolitinib）联用疗法的重要研究方向。

三、现货产品介绍（FX0672系列）

1. 产品基本信息

 

2. 现货包装规格

 

注：不同规格具体采购价格详见产品页面或垂询技术客服。

3. 核心生化与实验优势

· hFc融合介导的天然双价二聚化优势：融合人源IgG1-Fc片段后，重组蛋白以稳定同源二聚体形式存在（表观迁移率65–75 kDa）。该二聚构象在体外显著提升了对TSLP的亲和avidity效应，空间上更贴近活细胞膜表面的多聚展示状态。

· 293F真核翻译后修饰体系：原核表达系统缺乏复杂的N-糖基化机制，而CRLF2胞外区存在数个天然糖基化位点。293F人源真核系统确保了正确的蛋白质三级折叠和糖链装配，避免了受体构象变性或假性空间位阻。

· C端hFc & His双重标签设计：hFc标签可直接使用抗人IgG-Fc二抗或Protein A/G表面在ELISA、流式微球或SPR传感器芯片上高定向捕获；His标签为正交质控验证、多聚体分析及抗体捕获提供第二维度的高效结合位点。

· 低内毒素（<0.1 EU/μg）与高纯度（>95%）保障：内毒素严格限定在0.1 EU/μg以下，满足PBMC、原代单核/树突状细胞等高灵敏度免疫细胞的体外刺激或阻断实验，排除非特异性内毒素反应干扰。

四、适用研究方向与候选用途

合规使用提示：本节所列研究方向与候选用途系基于公开发表的分子生物学文献及该重组蛋白构象特点归纳提供。具体在某一特定实验系统中的功能表现，应以随货分析检验证书（COA）及课题组的预实验验证为准；未经各实验室独立体系验证的指标，请勿直接视作已定型应用。

· TSLP–TSLPR–IL-7Rα三元受体复合物相互作用解析：候选用于利用SPR（Biacore）、BLI（FortéBio）或竞争性ELISA测定TSLP配体与可溶性CRLF2的结合动力学参数（kon、koff、KD），或研究IL-7Rα胞外段存在下的三元组装机制。

· 可溶性受体诱饵（Decoy Receptor）与中和阻断实验：利用高亲和力hFc融合蛋白作为体外可溶性诱饵，竞争性结合游离TSLP，评估其在细胞共培养模型中对TSLP介导的下游信号阻断效能。

· 靶向CRLF2/TSLPR治疗性抗体筛选与表位鉴定：作为高纯度固相抗原或液相捕获分子，候选用于杂交瘤筛选、噬菌体展示文库筛选、全人源抗CRLF2单抗或双特异性抗体（如TSLPR×IL-7Rα）的亲和力测定及结合特异性交叉验证。

· 树突状细胞/淋巴细胞体外激活与2型过敏反应机制评估：候选用于过敏性炎症体外模拟实验，作为配体结合阻断试剂，探索TSLP-CRLF2通路在mDC活化、OX40L表达及初始T细胞Th2极化中的调控作用。

· CRLF2异常型B-ALL与JAK-STAT靶向药物研发工具：候选用于血液肿瘤模型中可溶性受体检测体系构建、CAR-T嵌合抗原受体体外结合靶标验证，以及作为研究JAK抑制剂（如Ruxolitinib）和抗体协同杀伤实验的阳性试剂配套。

· 免疫学检测试剂盒开发及受体结合标准品：候选用于建立检测人血清或体液中内源性脱落可溶性TSLPR（sTSLPR）的夹心ELISA、化学发光体系的标准曲线定量校准物。

五、选型FAQ：核心技术疑问解答

Q1：为什么CRLF2胞外区在天然状态下必须与IL-7Rα结合才能高亲和力结合TSLP？

这由其结构生物学特性决定。X-射线晶体学与冷冻电镜研究显示，TSLP蛋白表面具有两个独立的结合表位（Site 1与Site 2）。CRLF2胞外段单独与TSLP（Site 1）结合时的解离常数处于微摩尔级（μM），结合极不稳定。当IL-7Rα参与时，IL-7Rα结合TSLP的Site 2，并与CRLF2胞外段产生直接的受体-受体侧向相互作用，将结合亲和力提升数个数量级至皮摩尔级（pM）。因此，体外单独测定CRLF2与TSLP结合时，通常需要提高反应浓度或采用双价Fc融合形式来增强结合信号。

Q2：采用hFc融合表达的CRLF2相比单纯His标签单体有哪些具体实验优势？

· 亲和avidity提升：hFc依靠铰链区二硫键形成稳定同源二聚体，将单价结合转变为双价展示，结合表观亲和力显著增强。

· 天然定向固定：在SPR/BLI或ELISA中，可利用抗人Fc抗体或Protein A/G偶联表面进行高取向固定，避免化学法偶联导致抗原结合结构域失活。

· 二抗选择丰富：直接使用市售标准化抗人IgG-Fc-HRP或荧光标记二抗进行信号放大检测，无需单独针对CRLF2筛选二抗。

Q3：CRLF2基因重排及Phe232Cys（F232C）点突变是如何促进B-ALL白血病发生的？

CRLF2基因重排（如P2RY8-CRLF2或IGH-CRLF2）导致受体在淋巴母细胞表面上调数十倍至数百倍，敏化了细胞对痕量外源TSLP的反应。而Phe232Cys（F232C）突变发生于跨膜段附近，突变引入的半胱氨酸能够在相邻受体链间自发形成分子间共价二硫键。这种构象锁定了受体胞内的JAK2激酶结构域，在完全无需TSLP配体结合的情况下诱发持续的配体非依赖性二聚化与反式磷酸化，引起STAT5持续入核转录，驱动白血病细胞失控性增殖。

Q4：为什么重组蛋白复溶时严禁剧烈涡旋（Vortex）？长期保存为何需添加载体蛋白？

· 防止剪切变性与聚集：冻干蛋白在水化过程中分子结构处于松弛展开状态，剧烈涡旋产生的机械剪切力及气-液界面张力易导致蛋白质变性并诱发不可逆沉淀；开盖前应先离心并以无菌水温和吹打、静置溶解。

· 规避容器壁吸附损失：当重组蛋白稀释至极低浓度（如<0.1 mg/mL）时，疏水管壁的非特异性物理吸附会造成显著的蛋白损失。因此长期分装冻存（−20℃至−80℃）时，必须使用含载体蛋白（如0.1%无内毒素BSA或HSA）的缓冲液进行等分分装。

Q5：10 μg、20 μg、50 μg与100 μg规格如何按研发阶段合理选用？

· 10 μg / 20 μg：适合前期的技术可行性探索、配对结合动力学（SPR/BLI）预实验摸索或ELISA捕获涂层初筛。

· 50 μg：适合常规细胞功能阻断实验、受体竞争性抑制测定曲线建立或抗体亲和力梯度测定。

· 100 μg：适合中高通量小分子/抗体库筛选、大规模细胞学功能评估及跨批次稳定性平行对比实验。

六、规格质控指引与定制延伸

1. 批次质检与文件索取

本品出厂前均经过严格的理化与生物学指标放行检验。产品的完整氨基酸序列信息、冻干前缓冲体系（PBS, pH 7.4）、复溶后澄清度检测、批次SDS-PAGE胶图、实测纯度与内毒素数据，请详见随货附带的《分析检测报告》（COA）或联系官方技术支持下载。

2. 配套靶标与定制化服务

针对TSLP信号转导复杂的多亚基特征，本平台同时提供全套信号轴试剂与工程化定制能力：

· 天然配对配体与共受体：配套提供高活性人源TSLP重组蛋白（Human TSLP）及人源IL-7Rα胞外区重组蛋白（Human IL-7Rα/CD127）。

· 定制工程化改造：支持按需定制单体His-tag版本、生物素定点标记（AviTag™偶联）、小鼠源同源分子（Mouse TSLPR/CRLF2），或构建特定致癌突变体（如CRLF2 F232C胞外+跨膜区重构蛋白）。

· 工业级放大生产：提供从毫克级（mg）到克级（g）的工业批次悬浮发酵与高纯度纯化服务。