一、分子特性与产品描述

成纤维细胞生长因子 7（FGF-7），最初因其对皮肤角质形成细胞强烈的促增殖作用而被命名为角质形成细胞生长因子（Keratinocyte Growth Factor, KGF）。

人 FGF-7 前体蛋白由 194 个氨基酸残基组成，去除信号肽后的成熟肽段包含 163 个氨基酸，分子量约为 18.9 kDa，属于肝素结合型分泌多肽。

1.1 上皮-间充质旁分泌调控模式与受体特异性

与 FGF 家族中大多数对上皮细胞和间充质细胞均有作用的广谱因子（如 bFGF）不同，FGF-7 展现出极强的上皮靶向专一性：

· 表达来源：在体内，FGF-7 仅由基质细胞、成纤维细胞及平滑肌细胞等间充质来源的细胞合成并分泌。

· 受体特异性：FGF-7 仅特异性结合成纤维细胞生长因子受体 2 的 IIIb 剪切体（FGFR2b，亦称 KGFR）。该受体几乎仅表达于上皮来源的细胞表面（如表皮角质形成细胞、呼吸道上皮细胞、肠道上皮细胞、肝细胞及腺体上皮细胞）。这种严格的“间充质产生—上皮受体响应”机制构成了器官发育中典型的间充质-上皮旁分泌调控环路。

1.2 苏州丰度生物 rhFGF-7 的质量质控标准

苏州丰度生物科技有限公司依托高效的重组表达与多级蛋白纯化技术平台，生产的重组人成纤维细胞生长因子 7（rhFGF-7/KGF）具备以下高度严谨的质量规范：

· 分子纯度：经 SDS-PAGE 及 SEC-HPLC（高效体积排阻色谱）分析，纯度 ≥ 95%。

· 生物学活性（ED₅₀）：采用促 4MBr-5（猕猴肺上皮细胞）或 BaF3-FGFR2b 转染细胞增殖法测定，ED₅₀ ≤ 2.0 ng/mL（比活大于 5×10⁵ U/mg）。

· 超低内毒素控制：采用鲎试剂（LAL）法检测，内毒素控制在 < 0.1 EU/μg，确保不会对原代上皮细胞造成炎性干扰。

· 批次一致性：严格测定分子量与高阶结构，确保无宿主蛋白及核酸残留。

二、实验原理与上皮信号转导网络

rhFGF-7/KGF 调控上皮细胞增殖与上皮类器官分支形态发生的核心机制如下：

2.1 三元复合物形成与受体激活

上皮细胞表面的 FGFR2b 包含胞外 Ig 样结构域（IgII 和 IgIIIb）。rhFGF-7 结合 FGFR2b 时，需要细胞膜表面的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPG）或外源添加的肝素（Heparin）作为辅受体，共同形成稳定的“2:2:2”三元激活复合物。

2.2 胞内信号转导通路

受体二聚化激活胞内酪氨酸激酶自磷酸化，招募 FRS2/Grb2 适配蛋白，激活两条核心下游通路：

· Ras-Raf-MEK-ERK1/2 通路（MAPK 通路）：磷酸化的 ERK1/2 转运至核内，激活 c-Myc、c-Fos 等早期反应基因，促使 Cyclin D1 表达，推动上皮细胞由 G1 期进入 S 期，加速上皮细胞的体外扩增。

· PI3K-Akt 存活通路：磷酸化 Akt 抑制 Bad 及 Caspase 级联反应，显著增强上皮细胞对氧化应激、辐射及低血清环境的抗悬浮凋亡（Anoikis）能力。

2.3 在类器官分支形态发生（Branching Morphogenesis）中的形态发生素作用

在肺类器官（Lung Organoids，如 2 型肺泡上皮细胞 AT2）、乳腺类器官、前列腺类器官及肠道上皮类器官的构建中，rhFGF-7 是驱动上皮芽生（Budding）与管腔分支的核心形态发生素。

它能够诱导上皮细胞发生局部的细胞骨架重排与基底膜重构，促使单层上皮球体向复杂分支的三维结构演进。

三、实验前期准备与试剂耗材匹配

为保障 rhFGF-7 在微量溶解与长期类器官培养中的生物活性稳定，须准备以下配套试剂及无核酸酶级耗材：

3.1 实验试剂准备

· 重组人成纤维细胞生长因子 7（rhFGF-7/KGF）：冻干粉。

· 重构溶剂：无菌无钙镁 PBS（pH 7.4）。

· 保护性载体蛋白：0.1% 重组人血白蛋白（HSA）或 0.1% 无内毒素牛血清白蛋白（BSA）。关键作用：竞争性占据塑料壁上的吸附位点，防止微量蛋白损耗。

· 辅助因子：无菌肝素钠（Heparin Sodium，无血清类器官培养基中建议添加终浓度 1–2 μg/mL）。

· 基础培养基：Advanced DMEM/F12、KGM 或类器官专用基础培养基。

3.2 实验耗材选型（苏州丰度生物推荐配置）

· 苏州丰度生物低吸附微量离心管（1.5 mL）：特殊表面改性，极大降低肝素结合蛋白的物理贴附。

· 苏州丰度生物无菌带滤芯移液吸头（10 μL、200 μL、1000 μL）：防气溶胶交叉污染。

· 苏州丰度生物 0.22 μm PES 针头式滤器：低蛋白结合率滤膜。

· 苏州丰度生物低贴壁/组织培养板（24 孔板/48 孔板）：适应基质胶（Matrigel）包埋滴滴培养（Dome culture）。

四、实验步骤与上皮类器官培养操作规程（SOP）

步骤 1：离心沉降（重构前必备步骤）

收到冻干粉试剂后，管盖或管壁可能附着微量粉末。开盖前须将离心管放入微型离心机中，以 10,000 × g 离心 30–60 秒，使冻干粉完全聚集至管底。

步骤 2：储存母液（Stock Solution）配制

· 在无菌超净工作台中，吸取适量含 0.1% HSA（或 BSA）的无菌 PBS（pH 7.4）。

· 向离心管中加入溶剂，配制成浓度为 100 μg/mL 的储存母液（例如：10 μg 冻干粉加入 100 μL 含保护蛋白的 PBS）。

· 用移液器缓慢吹打 5–10 次，直至冻干粉完全溶解。严禁剧烈涡旋或高速振荡，防止产生气泡破坏蛋白质三级结构。

步骤 3：母液分装与冻存

将配制好的 rhFGF-7 母液按单次实验用量（如 10–20 μL/管）分装至苏州丰度生物低吸附离心管中。

贴好标签，立即放入 -80℃ 冰箱中长期保存（可稳定保存 12 个月）或 -20℃ 保存 6 个月。严禁反复冻融。

步骤 4：上皮细胞及类器官培养加样应用

工作终浓度推荐

· 表皮角质形成细胞/原代上皮细胞扩增：终浓度 10–20 ng/mL。

· 肺类器官/肠上皮类器官分支诱导：终浓度 50–100 ng/mL。

· 胸腺上皮细胞（TECs）维持：终浓度 20–50 ng/mL。

加样与换液：临用前，将一管母液从 -80℃ 取出置于冰上融化。按比例稀释至无血清培养基或基质胶覆盖的完全培养基中，充分混匀。类器官培养通常每 48–72 小时更换一次新鲜配制的含 rhFGF-7 完全培养基。

五、全过程注意事项与技术质控节点

· 靶细胞种属特异性（切勿用于成纤维细胞）：由于 FGFR2b 受体严格限定表达于上皮细胞，rhFGF-7 对成纤维细胞、内皮细胞或肌细胞无促增殖作用。若在实验中观察到其未能促进成纤维细胞增殖，属于正常生物学靶向特异性，而非蛋白失活。

· 载体蛋白与物理吸附防护：rhFGF-7 属于碱性肝素结合多肽，带正电荷较多，极易吸附于带负电荷的玻璃或普通塑料容器内壁。配制母液时必须保证 0.1% BSA/HSA 的存在，否则实际可用的游离蛋白浓度会显著降低。

· 肝素（Heparin）辅助因子的协同补充：在无血清或化学成分确定（Chemically Defined）的类器官培养体系中，建议补充 1–2 μg/mL 肝素钠。肝素可有效保护 rhFGF-7 免受培养基中蛋白酶的降解，并促进其与 FGFR2b 的高亲和力结合。

· 溶解气泡与剪切力控制：蛋白质在气-液界面极易发生解折叠与聚集。吹打重构时移液器吸头应保持浸入液面下，轻柔吹打，严禁剧烈振荡产生泡沫。

· 严禁反复冻融：冻融过程产生的冰晶剪切力会导致蛋白构象改变与活性丧失。分装规格须严格按照单次实验用量设定，解冻后的母液若未用完，可在 4℃ 避光保存并在 2 周内用完，切勿重新入库 -80℃ 冻存。

六、总结

重组人成纤维细胞生长因子 7（rhFGF-7/KGF）作为间充质-上皮旁分泌调控网络的核心因子，其受体结合的高度特异性使其成为上皮细胞扩增、类器官分支形态发生及创伤修复研究的核心原料。

通过规范的离心重构、保护性载体蛋白添加、肝素辅助协同及严谨的分装冻存，能够显著提升上皮类器官的诱导成球率与分支形态演进。

苏州丰度生物科技有限公司将持续致力于高品质细胞因子与类器官配套试剂的技术研发，为上皮生物学研究与再生医学领域提供坚实的技术支撑。